Adenovirus, ДНК [реал-тайм ПЦР]

Исследование, в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции определяется генетический материал (ДНК) аденовируса в биоматериале. Направлено на диагностику различных клинических форм аденовирусной инфекции.

Синонимы русские

Аденовирус, аденовирусная инфекция.

Синонимы английские

Adenovirus, DNA [Polymerase chain reaction, PCR].

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Амниотическую жидкость, мазок из зева (ротоглотки), мазок из носа, мазок из носоглотки, отделяемое конъюнктивы, слюну.

Как правильно подготовиться к исследованию?

За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.

Общая информация об исследовании

Аденовирус (Adenovirus) – это ДНК-содержащий безоболочечный вирус. Он является возбудителем различных клинических форм аденовирусной инфекции, в том числе острой респираторной вирусной инфекции (ОРВИ), ринофарингита, кератоконъюнктивита, фарингоконъюнктивальной лихорадки, а также более тяжелых состояний (пневмонии и энцефалита). Заболеваемость аденовирусной инфекцией выше среди детей, однако эпизодические случаи и эпидемии также наблюдаются среди взрослого населения. Тяжелые формы аденовирусной инфекции характерны для пациентов с иммуносупрессией.

Аденовирус имеет определенное сходство с другими вирусными и бактериальными инфекциями, протекающими с поражением респираторного тракта (Enterovirus, Epstein-Barr, Herpes Simplex, Cytomegalovirus, пиогенный стрептококк и др.), что значительно затрудняет дифференцирование этих заболеваний на основании клинических признаков, поэтому в диагностике аденовирусной инфекции ведущая роль принадлежит лабораторным методам исследования. В последнее время наибольшее предпочтение отдается полимеразной цепной реакции – ПЦР – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале фрагменты генетического материала возбудителя инфекции. Это один из лучших способов точно и быстро диагностировать аденовирусную инфекцию.

Идентификация аденовируса должна быть осуществлена в кратчайшие сроки, что связано с высокой заразностью инфекции. Кроме того, эффективность противовирусных препаратов максимальна при их назначении в первые 48 часов от начала заболевания, что также диктует необходимость скорейшей постановки окончательного диагноза. По этой причине высокочувствительный метод выявления аденовируса в культуре клеток не может быть использован для быстрой диагностики заболевания (получение результатов занимает 3-4 недели). Исследование с помощью ПЦР, а также экспресс-тест для определения антигена и иммунофлюоресцентный анализ относятся к так называемым быстрым диагностическим тестам, потому что позволяют получить результат в гораздо более короткие сроки. ПЦР занимает особое место среди таких "быстрых" тестов, так как отличается очень высокой чувствительностью (99 %), сопоставимой с чувствительностью метода культивирования вируса.

На основании структурных и антигенных различий все аденовирусы разделены на 52 серотипа. Такое разнообразие приводит к тому, что результаты некоторых анализов на антигены аденовируса (ИФА, РИФ) нередко могут быть ложноотрицательными. В отличие от других методов идентификации аденовируса, исследование с помощью ПЦР основано на выявлении консервативного и характерного для всех серотипов аденовируса фрагмента ДНК (фрагмента hexongene), что обуславливает чрезвычайно высокую чувствительность анализа. При этом в отличие от других тестов чувствительность ПЦР практически не изменяется при взятии материала на фоне начатой терапии противовирусными препаратами. С другой стороны, исследование с помощью ПЦР не предназначено для дифференциальной диагностики различных серотипов вируса.

Выявление специфической для аденовируса последовательности ДНК также обуславливает высокую специфичность теста (98 %). Следует, однако, отметить, что положительный результат исследования не всегда указывает на наличие "живого" вируса (репликации) и не всегда означает, что пациент остается заразным для окружающих. Фрагменты ДНК аденовируса могут быть обнаружены в отделяемом носоглотки в течение длительного времени после эпизода аденовирусной инфекции. Эту особенность следует учитывать при обследовании часто болеющего пациента, чаще всего ребенка. Так, например, выявление Adenovirus с помощью ПЦР у пациента с недавно перенесенной аденовирусной инфекцией и с признаками ОРВИ может свидетельствовать о новом эпизоде заражения аденовирусом этого же или другого серотипа или о бессимптомном носительстве, протекающем на фоне острой инфекции каким-либо другим вирусом. По этой причине исследование на Adenovirus дополняют некоторыми другими лабораторными анализами, включающими тесты на наиболее распространенных возбудителей ОРВИ. Кроме того, необходимо исключение бактериальной суперинфекции.

Adenovirus также может быть обнаружен в мазках из зева 0,6-3 % здоровых детей. Интерпретировать результат исследования следует с учетом дополнительных анамнестических, клинических и лабораторных данных.

Для чего используется исследование?

• Для дифференциальной диагностики острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ: Enterovirus, Epstein-Barr, Herpes Simplex, Cytomegalovirus и др.).
• Для диагностики аденовирусной инфекции.

Когда назначается исследование?

• При симптомах острой респираторной вирусной инфекции (ОРВИ): внезапном начале болезни, лихорадке, боли в горле, миалгии, головной боли, сухом кашле, боли в грудной клетке, одышке.
• При симптомах острого фарингоконъюнктивита: лихорадке, боли в горле, двусторонней гиперемии и зуде конъюнктивы, слезотечении.

Что означают результаты?

Референсные значения: не обнаружено.

Результат "не обнаружено":

• отсутствие аденовирусной инфекции.

Результат "обнаружено":

• текущая аденовирусная инфекция;
• "бессимптомное носительство" в период реконвалесценции.

Важные замечания

• Исследование не предназначено для дифференциальной диагностики различных серотипов аденовируса.
• Положительный результат не означает, что пациент остается заразным для окружающих.
• Adenovirus может быть обнаружен в мазках из зева 0,6-3 % здоровых детей.
• Интерпретацию результатов исследования следует проводить с учетом дополнительных анамнестических, клинических и лабораторных данных.

Также рекомендуется

• Herpes Simplex Virus 1/2, иммунофлюоресценция
• Лабораторная диагностика инфекционного мононуклеоза
• Streptococcus pyogenes, ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Streptococcus pneumoniae, ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Посев на гемолитический стрептококк группы А
• Influenza virus A/B (вирусы гриппа А/В), РНК [реал-тайм ПЦР]
• Свиной грипп (Influenza virus A/H1N1, sw2009), РНК [реал-тайм ПЦР]

Кто назначает исследование?

Инфекционист, педиатр, оториноларинголог, врач общей практики.

Литература

• Kalu SU, Loeffelholz M, Beck E, Patel JA, Revai K, Fan J, Henrickson KJ, Chonmaitree T. Persistence of adenovirus nucleic acids in nasopharyngeal secretions: a diagnosticconundrum. Pediatr Infect Dis J. 2010 Aug;29(8):746-50.
• Stroparo E, Cruz CR, Debur Mdo C, Vidal LR, Nogueira MB, Almeida SM, Pereira LA, Rotta I, Raboni SM. Adenovirus respiratory infection: significant increase in diagnosis using PCRcomparing with antigen detection and culture methods. Rev Inst Med Trop Sao Paulo. 2010 Nov-Dec;52(6):317-21.
• Cooper RJ, Yeo AC, Bailey AS, Tullo AB. Adenovirus polymerase chain reaction assay for rapid diagnosis of conjunctivitis. Invest Ophthalmol Vis Sci. 1999 Jan;40(1):90-5.
• Echavarria M, Sanchez JL, Kolavic-Gray SA, Polyak CS, Mitchell-Raymundo F, Innis BL, Vaughn D, Reynolds R, Binn LN. Rapid detection of adenovirus in throat swab specimens by PCR during respiratory disease outbreaks amongmilitary recruits. J Clin Microbiol. 2003 Feb;41(2):810-2.