ГистоFISH анализ t(11;14)(q13;q32) на парафиновых срезах

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) – цитогенетический метод исследования, в процессе которого детектируется наличие и локализация специфических ДНК-последовательностей на хромосомах. Транслокация t(11;14)(q13;q32), определяемая при В-клеточной опухоли, приводит к перестройке протоонкогена ССND1 (BCL1, PRAD1) в локусы генов легких цепей иммуноглобулинов. Анализ наличия транслокации является важнейшей диагностической процедурой при лимфоме из клеток мантийной зоны.

Синонимы русские

Флуоресцентная гибридизация in situ, молекулярная диагностика в онкогематологии, В-клеточная опухоль, лимфома из клеток мантийной зоны.

Синонимы английские

Analysis of the translocation t(11;14)(q13;q32) on paraffin slides (FISH Histology, quantitative), molecular diagnostics of oncohematological diseases, B – cell tumor, Mantle Cell Lymphoma, MCL.

Метод исследования

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Образец ткани в парафиновом блоке.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Специальной подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

В настоящее время появление высокоспецифичных методов диагностики и эффективных схем лечения в онкогематологии вывело данную область медицины на достаточно высокий уровень точной диагностики заболеваний и их успешного лечения. Группа лимфопролиферативных заболеваний также широко изучается, но остается достаточно сложной для своевременной постановки диагноза и терапии.

Таким примером может послужить лимфома из клеток мантийной зоны, являющаяся одной из разновидностей неходжкинской лимфомы. Прогрессирует либо медленно, либо очень бурно и агрессивно. Страдают преимущественно мужчины пожилого возраста. Заболевание характеризуется поражением лимфатических узлов различных групп с их увеличением, размягчением, отсутствием болезненности. Чаще обращение к специалисту происходит на достаточно поздней стадии, когда в процесс вовлекаются другие органы и системы. Как правило, пациенты уже имеют общие симптомы опухолевой интоксикации: выраженную слабость, субфебрильную лихорадку, снижение массы тела, потливость. Возникает спленомегалия – увеличение селезенки, поражается желудочно-кишечный тракт, реже легкие, органы мочевыделительной и половой систем. При прогрессировании заболевания и агрессивном течении возможно вовлечение в процесс центральной нервной системы.

Возникновение лимфомы из клеток мантийной зоны связано с возникновением определенной хромосомной аберрации (перестройки) – транслокации t(11;14)(q13;q32), которая приводит к активации протоонкогена CCND1/IGH и нарушению клеточного цикла, в результате чего возникает опухолевая лимфопролиферативная трансформация.

Диагностика лимфомы из клеток мантийной зоны основана на тщательном сборе анамнеза, КТ и МРТ, УЗИ, ПЭТ-КТ. Определяющим методом является биопсия костного мозга, пораженных лимфатических узлов или других участков с подозрением на опухолевую трансформацию.

Одним из важнейших критериев постановки диагноза служит выявление транслокации t(11;14)(q13;q32) в образце ткани пациента с подозрением на данное заболевание методом флюоресцентной гибридизации in situ (fluorescence in situ hybridization, FISH). Это молекулярно-цитогенетическое исследование направлено на обнаружение генетических аномалий, получило распространение в клинической практике вследствие высокой диагностической ценности, оценки прогноза заболевания и контроля лечения. При реакции FISH используют ДНК-зонды, обладающие флуоресценцией (способностью к свечению), комплементарные (соответствующие) последовательности ДНК в измененных хромосомах. Для каждой конкретной хромосомной аберрации существуют специфические ДНК-зонды, что позволяет получать достаточно достоверные результаты. В процессе реакции при наличии в образце ткани опухолевых клеток с хромосомными нарушениями последовательность нуклеотидов зонда присоединяется к соответствующему участку хромосомы. Затем данный комплекс возможно увидеть в микроскоп в виде свечения, что расценивается как положительный результат. Кроме того, можно оценить степень свечения и его локализацию, что позволяет провести не только качественный, но и количественный анализ. При отсутствии свечения результат считается отрицательным – это означает, что в данном образце нет клеток с наличием хромосомных нарушений.

Такие новейшие методы, как FISH-анализ, позволяют делать диагностику онкогематологических заболеваний информативной и качественной. FISH обладает высокой чувствительностью и специфичностью. При исследовании одного образца материала могут быть применены различные ДНК-зонды, специфичные для различных хромосомных аберраций, что позволяет одновременно проводить диагностику сразу нескольких нарушений.

Для чего используется исследование?

• Для уточнения диагноза при подозрении на онкогематологическое заболевание с преимущественным поражением лимфатических узлов;
• для выбора тактики лечения и прогноза заболевания, которые зависят от хромосомного состава опухоли;
• чтобы определить наличие или отсутствие конкретной хромосомной аберрации.

Когда назначается исследование?

• При подозрении на наличие злокачественного заболевания крови, для выбора тактики лечения и оценки прогноза, который зависит от хромосомного состава опухоли;
• при подтверждении диагноза при наличии клинических предпосылок: клиническая картина заболевания, изменения гемограммы, наличие специфических симптомов;
• при дифференциальной диагностике:
  • генерализованной формы лимфомы из клеток мантийной зоны – со случаями хронического В-клеточного лимфолейкоза с делецией гена ATM;
  • селезеночной формы лимфомы – с лимфоцитомами селезенки;
  • нодальной формы лимфомы – с диффузными В-крупноклеточными лимфомами;
  • первичной экстранодальной формы – с мальтомами и другими экстранодальными лимфомами;

• при контроле "минимальной остаточной болезни" после химиотерапии или пересадки костного мозга.

Что означают результаты?

Выявляется наличие или отсутствие аберрантных хромосом в исследуемом образце.

Лимфома из клеток мантийной зоны имеет прогноз намного хуже, чем хронический лимфоцитарный B-клеточный лейкоз (B-CLL), LP-иммуноцитома и центробластно/центроцитарная лимфомы. Показано, что транслокация t (11;14), встречающаяся в лимфоме из клеток мантийной зоны, приводит к дерегуляции гена CCND1, кодирующего циклин D1, который участвует во вхождении клетки в клеточный цикл (из фазы G0 в G1). Лимфомы из клеток мантийной зоны составляют 10% всех неходжкинских лимфом (НХЛ) и в основном наблюдаются у пациентов старше 20 лет. Среднее время жизни – менее 4 лет.

Большое количество дополнительных хромосомных нарушений и наличие амплификации отдельных локусов характерно для бластоидного варианта НХЛ из клеток мантии, имеющего наиболее неблагоприятный прогноз. Известны описания семейных случаев данного заболевания. Отмечено, что НХЛ из клеток мантии во втором поколении диагностируются в более молодом возрасте и им свойственны более агрессивное клиническое течение и бластная морфология опухоли.

Кто назначает исследование?

Гематолог, онколог.

Также рекомендуется

[02-043] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с обязательной микроскопией мазка крови)

[12-022] Гистологическое исследование биоптата лимфатического узла (1 узел) с использованием рутинных методик окраски

[12-114] Иммуногистохимическое исследование клинического материала (с использованием 5 антител)

Литература

• Иммуногистохимические методы: Руководство / Ed. by George L. Kumar, Lars Rudbeck.: DAKO / Пер. с англ. под ред. Г.А.Франка и П.Г.Малькова. – М., 2011. – 224 с.
• Sander B, Quintanilla-Martinez L, Ott G, Xerri L, Kuzu I, Chan JK, Swerdlow SH, Campo E. Mantle cell lymphoma--a spectrum from indolent to aggressive disease. Virchows Arch. 2016 Mar;468(3):245-57.
• Marcucci M, Marcucci G, Cordeiro MS, León JE, Araujo JP, de Oliveira JX, Santos KCP. Mantle cell lymphoma: involvement of nodal and extranodal sites in the head and neck, with multifocal oral lesions. Autops Case Rep. 2017 Sep 30;7(3):26-31.
• Body S, Esteve-Arenys A, Miloudi H, Recasens-Zorzo C, Tchakarska G, Moros A, Bustany S, Vidal-Crespo A, Rodriguez V, Lavigne R, Com E, Casanova I, Mangues R, Weigert O, Sanjuan-Pla A, Menéndez P, Marcq B, Picquenot JM, Pérez-Galán P, Jardin F, Roué G, Sola B. Cytoplasmic cyclin D1 controls the migration and invasiveness of mantle lymphoma cells. Sci Rep. 2017 Oct 24;7(1):13946.
• Yin CC, Luthra R. Molecular detection of t(11;14)(q13;q32) in mantle cell lymphoma. Methods Mol Biol. 2013;999:211–6.