Диагностика хронического эндометрита: CD20+, CD56+, CD138+, DP-DQ&DR

Хронический эндометрит рассматривают как аутоиммунный процесс, для которого характерна инфильтрация эндометрия NK-клетками, B-лимфоцитами и группой антигенов гистосовместимости HLA-DP, DQ, DR, а также нарушение экспрессии рецепторов стромальных и эпителиальных клеток к половым стероидам в эндометрии. При контакте с антигенами происходит активация лимфоцитов, которые формируют воспалительный процесс в ткани эндометрия, а затем аутоантигены продолжают поддерживать активацию лимфоцитов. Определение ряда иммунокомпетентных клеток позволяет достоверно выявить наличие хронического воспаления в эндометрии, оценить степень его выраженности, а также выявить аутоиммунный характер воспаления.

Синонимы русские

Морфологическое и иммуноцитохимическое исследование эндометрия.

Синонимы английские 

Morphological examination of the endometrium and IСC (immunocytoochemistry), immunocytochemical analysis of endometrial biopsies.

Метод исследования

Иммуноцитохимический + жидкостная цитология.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Аспират из полости матки.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исключить (по согласованию с врачом) использование влагалищных контрацептивов, лекарственных средств, тампонов, спринцевание в течение 48 часов до проведения исследования.
• Женщинам исследование рекомендуется проводить с 10-й по 20-й день менструального цикла.
• Исключить половые контакты в течение 2 суток до исследования.
• Исследование не рекомендуется проводить при воспалительных гинекологических заболеваниях.
• Нельзя производить взятие мазка после обработки шейки матки раствором уксусной кислоты или Люголя.

Общая информация об исследовании

Стандартное морфологическое исследование эндометрия включает в себя определение клеточного состава, соотношения клеток, фазы менструального цикла, патологических изменений – признаков атипии, инфильтрации воспалительными клетками при световой микроскопии. Материалом для исследования является эндометрий, полученный методом аспирационной биопсии эндометрия или при гистероскопии с биопсией эндометрия, после выскабливания (кюретаж полости матки).

Иммуноцитотохимия – это метод исследования клеток, основанный на обнаружении специфических антигенов с помощью присоединения к ним антител, меченных флюорохромом или ферментом. Антигены – молекулы белков или углеводов, имеющие уникальную трёхмерную структуру, способные индуцировать образование антител. Антитела – иммуноглобулины, распознающие антигены и присоединяющиеся к ним во время реакции "антиген-антитело". Антигены и антитела – это молекулы, неразличимые при исследовании методом световой и электронной микроскопии. Для обнаружения специфических антигенов к образцу клеток добавляют реагент, содержащий меченные флюорохромом или ферментом антитела, в результате чего образуется иммунный комплекс "антиген-антитело". Комплексы формируют специфическое окрашивание клеток и их внутренних структур, обеспечивая детекцию патологических изменений на молекулярном уровне. Иммуноцитохимическое исследование позволяет верифицировать онкологические заболевания, метастатические поражения, определить их гистологическую принадлежность, оценить экспрессию маркеров, влияющих на прогноз заболевания и подбор схемы эффективной химиотерапии.

Эндометрий – слизистая оболочка, выстилающая полость матки изнутри, необходимая для имплантации оплодотворенной яйцеклетки и развития плаценты во время беременности. Он подвергается динамическим структурным и функциональным изменениям во время менструального цикла под действием женских половых гормонов. Ряд патологических состояний нарушает нормальное циклическое функционирование эндометрия у женщин репродуктивного возраста. Наиболее распространенными причинами считаются хронический эндометрит, полипы эндометрия, ановуляция и миома матки.

Хронический эндометрит – это воспалительное заболевание эндометрия, чаще поражающее женщин репродуктивного возраста, но встречающееся и в постменопаузе. Наиболее распространенный симптом – маточные кровотечения, не связанные с менструацией. Кроме того, хронический эндометрит может быть причиной бесплодия и самопроизвольного прерывания беременности. Факторами риска являются воспалительные заболевания органов малого таза, внутриматочные контрацептивы (спирали), хирургические манипуляции в полости матки (выскабливание), недавняя беременность, инфекционно-воспалительные осложнения послеродового периода, попытки экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов. Возбудителями заболевания чаще всего являются Escherichia coli, Enterococcus faecalis, различные виды стрептококков, Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum и вирусы (ВПЧ, вирусы герпеса, энтеровирус).

Инфекционные агенты запускают защитную воспалительную реакцию, происходит инфильтрация эндометрия макрофагами, лимфоцитами, плазматическими клетками, пролиферация фибробластов. Активированные макрофаги выделяют медиаторные цитокины, вызывающие активацию T- и B-лимфоцитов. Даже после полной элиминации инфекционного возбудителя воспаление может поддерживаться за счет аутоиммунных процессов – за счет первоначальной поликлональной активации лимфоцитов с последующей выработкой аутоиммунных антител. Воспаление вызывает изменения нормальной циклической дифференцировки и функционирования эндометрия, приводящие к нарушениям менструального цикла или снижению способности к имплантации оплодотворенной яйцеклетки.

Золотым стандартом диагностики хронического эндометрита считается гистологическое или цитологическое исследование биоптата эндометрия. Главным маркером является инфильтрация стромы эндометрия плазматическими клетками. Также часто обнаруживаются и другие воспалительные элементы: нейтрофилы (обычно в поверхностном эпителии и железах), субэпителиальные лимфоцитарные инфильтраты, гистиоциты с гемосидерином и редкие эозинофилы.

Поскольку эпизодические плазматические клетки обнаруживаются и в поздней секреторной фазе, и в строме полипов эндометрия, их присутствие не всегда означает инфекционную этиологию. В очень редких случаях обнаружение плазматических клеток в биоптате эндометрия может свидетельствовать о лимфопролиферативном заболевании. 

Для дифференциальной диагностики используется метод иммуноцитохимии, позволяющий определить маркеры хронического эндометрита на молекулярном уровне и идентифицировать воспалительные клетки: плазматические клетки CD138, натуральные киллеры CD56 и CD16, B-клетки CD20 и группа антигенов гистосовместимости HLA-DP, DQ, DR (регион класса 2 (D-регион) системы HLA состоит из 3 сублокусов: DR, DQ, DP, кодирующих трансплантационные антигены). Основная функция молекул HLA-DP, DQ и DR заключается в представлении антигенных пептидов, в основном экзогенной природы, CD4+ Т-клеткам. Молекулы HLA-DP, DQ и DR конститутивно экспрессируются на В-лимфоцитах, моноцитах и дендритных клетках, но также могут быть обнаружены на цитотоксических/супрессорных Т-лимфоцитах и активированных гранулоцитах.

Увеличение количества натуральных киллеров CD56 и В-лимфоцитов (CD20) подтверждает активный хронический эндометрит. При активации аутоиммунного процесса при хроническом эндометрите определяется инфильтрация группой антигенов гистосовместимости HLA-DP, DQ, DR.

При верификации диагноза назначается специфическая антибактериальная терапия. По результатам исследования можно оценить эффективность проводимой терапии, определить показания к ее коррекции.

Для чего используется исследование?

• Для определения характера иммунологических нарушений, выявления пациентов с аутоиммунным воспалением и аутоиммунным ответом в эндометрии, что определяет тактику их ведения.

Когда назначается исследование?

• При необходимости подтверждения или исключения хронического эндометрита;
• при утолщении эндометрия по результатам УЗИ;
• при нарушении репродуктивной функции (бесплодие, привычное невынашивание беременности, преждевременные роды);
• при нарушении менструального цикла (перименструальные кровянистые выделения, обильные менструации, ациклические маточные кровотечения); дисфункции яичников;
• при верификации диагноза при гиперплазии эндометрия, миоме матки, эндометриозе, хронических воспалительных заболеваниях;
• в качестве дополнительного исследования при оценке потенциальной эффективности гормональной терапии.

Что означают результаты?

Заключение выдается в виде описательного ответа с подсчетом количества клеток, экспрессирующих маркеры CD20+, CD56+, CD138+ и HLA-DR.

У женщин с хроническим активным эндометритом значительно повышено количество субпопуляции NK-клеток (CD56+) и субпопуляции В-лимфоцитов (CD20+), инфильтрирующих эндометрий, по сравнению пациентками контрольной группы.

Для аутоиммунного эндометрита характерна инфильтрация эндометрия цитотоксическими B-лимфоцитами (CD20+), плазматическими клетками (CD138+) и группой антигенов гистосовместимости HLA-DP, DQ, DR с последующим формированием аутоатител.

CD138+ клетки (синдекан 1) – протеогликаны, входящие в состав клеточных мембран плазматических клеток, в принципе, нехарактерны для здорового эпителия эндометрия. Интенсивность проявления клинических симптомов заболевания связана с повышенной концентрацией плазматических клеток (CD138+) в эндометрии.

Также рекомендуется

[12-125] Ki-маркер пролиферативной активности

[12-135] Исследование рецептивности эндометрия: рецепторы к эстрогенам, рецепторы к прогестеронам (в строме и железах эндометрия), Ki-67 (индекс пролиферативной активности), (кроме PTEN)

[12-071] Гистологическое исследование биопсийного материала

Литература

• Будчанов Ю.И. Главный комплекс гистосовместимости. Учебно-методическое пособие по общей иммунологии. Тверь, 2008. ГОУ ВПО Тверская ГМА Минздрава России. Кафедра клинической иммунологии с аллергологией.
• Калинина Н.М. Хронический эндометрит. Подходы к диагностике и терапии. Consilium Medicum. 2015; 17 (6).
• Techniques of immunohistochemistry: principles, pitfalls, and standardization. Richard W. Cartun, Clive R. Taylor and David J. Dabbs. Diagnostic Immunohistochemistry, Chapter 1, 1–46.
• Benign Endometrium. David W Kindelberger  and Marisa R Nucci. Gynecologic Pathology: A Volume in the Series: Foundations in Diagnostic Pathology, Chapter 6, 197-232.
• The Female Genital Tract. Lora Hedrick Ellenson and Edyta C. Pirog Robbins and Cotran Pathologic Basis of Disease, Chapter 22, 991–1042.