Определение общей гемолитической способности комплемента (CH-50)

Определение общей гемолитической способности комплемента (CH-50) – оценка функциональной активности одного из важнейших компонентов иммунной системы, основанная на определении содержания в сыворотке крови конечных продуктов его активации.

Синонимы русские

Общая гемолитическая активность комплемента, общая гемолитическая способность сыворотки, общая функциональная активность комплемента.

Синонимы английские

Total Hemolytic Complement (CH50), Complement CH50, Total Hemolytic Complement Activity.

Единицы измерения

у.е./мл (условных единиц в миллилитре).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Комплемент представляет собой систему сывороточных белков, постоянно присутствующих в крови в неактивном состоянии. Белки системы комплемента обозначаются латинской буквой С и цифрой, а субъединицы белков или их активированные формы дополнительно маленькой латинской буквой (например С1q). Для активации системы комплемента требуется наличие в крови связанных с антигеном иммуноглобулинов классов G или М либо присутствие компонентов поверхностных структур клеток микроорганизмов. Взаимодействие определенных белков системы комплемента с этими веществами приводит к запуску каскада последовательных реакций между белками системы комплемента, в результате которых формируется так называемый мембраноатакующий комплекс. Он представляет собой полимерную белковую структуру из белков комплемента, которая по форме напоминает воронку или цилиндр. Мембраноатакующий комплекс встраивается в оболочку клетки-мишени и формирует в ней трансмембранные каналы, через которые внутрь клетки неконтролируемо поступает вода, вызывая её разрушение.

Система комплемента играет важную роль в уничтожении клеток патогенных микроорганизмов: бактерий, грибов, простейших, а также зараженных вирусами собственных клеток организма. Она способствует удалению образующихся в организме иммунных комплексов (связанных друг с другом антигенов и антител) и принимает участие в регуляции иммунного ответа. Благодаря наличию нескольких путей активации комплемента, эта система способна защищать организм не только от патогенов, к которым уже есть антитела, но и от тех, к которым еще не успел выработаться специфический иммунитет. Наследственные и приобретенные дефициты отдельных компонентов комплемента приводят к повышению частоты инфекционных заболеваний, прежде всего бактериальной этиологии. Повышенная склонность к развитию некоторых аутоиммунных заболеваний (системная красная волчанка и сходные синдромы, васкулиты, гломерулонефриты) при дефектах системы комплемента основана на недостаточном удалении из организма циркулирующих иммунных комплексов.

Вследствие того что итогом активации системы комплемента является образование мембраноатакующего комплекса, определение его содержания в сыворотке крови после запуска каскада системы комплемента позволяет оценить функциональную активность системы в целом. Долгое время активность комплемента определяли с помощью эритроцитов барана с фиксированными на них антителами. При добавлении исследуемой сыворотки в связи с наличием комплекса антиген-антитело запускался классический путь активации системы комплемента, который приводил к разрушению эритроцитов. Активность комплемента оценивали по количеству сыворотки, которое необходимо было добавить в смесь, чтобы вызвать разрушение 50% эритроцитов. Отсюда метод исследования получил название СН-50.

Однако описанный выше метод является косвенной оценкой образования мембраноатакующих комплексов, разрушающих эритроциты. Гораздо более точным и чувствительным является метод определения структур мембраноатакующего комплекса с помощью иммуноферментного анализа (ИФА). Для исследования используется раствор с содержащимися готовыми иммунными комплексами, который играет роль активатора. При добавлении исследуемой сыворотки он запускает каскад активации комплемента по классическому пути, в результате которого образуются молекулы мембраноатакующего комплекса. Полученным раствором заполняют планшет, в лунках которого сорбированы антитела к МАК. При формировании комплекса МАК-антитело специальный фермент, добавленный в реакционную смесь, изменяет её окраску. При этом интенсивность цвета пропорциональна концентрации образовавшихся мембраноатакующих комплексов в исследуемой сыворотке. Интенсивность окраски измеряется специальным прибором, который переводит параметры световой волны в цифры, соответствующие концентрации МАК. Используя стандартизованные шкалы перевода, полученные результаты записывают в единицах эквивалента СН50 в миллилитре, что делает интерпретацию результатов более понятной.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики иммунодефицитных состояний, обусловленных наследственными дефектами системы комплемента;
• для определения активности некоторых аутоиммунных заболеваний, сопровождающихся повышенным потреблением компонентов комплемента.

Когда назначается исследование?

• При диагностике врождённых иммунодефицитов в качестве скрининга на дефицит отдельных белков системы комплемента, при рецидивирующих бактериальных инфекциях;

• при мониторинге некоторых аутоиммунных заболеваний, обусловленных избытком и отложением в тканях иммунных комплексов.

Что означают результаты?

Референсные значения: 42 – 129 у.е./мл.

Снижение СН50 наблюдается обычно при дефиците или повышенном потреблении отдельных компонентов классического пути активации комплемента.

Важные замечания

• Данный тест является скрининговым, он позволяет исключить или подтвердить функциональные нарушения системы комплемента. При сниженных значениях СН50 целесообразно провести более углубленное обследование – специальные иммунохимические и функциональные тесты для выявления каждого компонента комплемента. Объем дообследования и его необходимость согласовывается с доктором.
• Данный тест оценивает активность исключительно классического пути активации комплемента. Для оценки альтернативного или лектинового пути необходимо проводить другие лабораторные тесты.

Также рекомендуется

• Определение функциональной активности основных путей системы комплемента

• С4 компонент комплемента

• С3 компонент комплемента

• Определение активности маннан-связывающего лектина

• Определение уровня MASP-2

• Предрасположенность к инфекционным заболеваниям. Недостаточность маннан-связывающего лектина (комплексное генетическое исследование, направленное на поиск частых мутаций гена MBL2, который кодирует маннан-связывающий лектин)

Кто назначает исследование?

Иммунолог, ревматолог, терапевт, педиатр, врач общей практики.

Литература

• Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 23e  by Richard A. McPherson MD MSc (Author), Matthew R. Pincus MD PhD (Author). St. Louis, Missouri : Elsevier, 2016. Pages 941–942.

1. A Manual of Laboratory and Diagnostic Tests, 9th Edition, by Frances Fischbach, Marshall B. Dunning III. Wolters Kluwer Health, 2015. Pages 600-602.

2. Клиническая лабораторная диагностика: национальное руководство: в 2 т. – T. II / Под ред. В. В. Долгова, В. В. Меньшикова. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. С. 21–25.

3. Аллергология и иммунология: национальное руководство / под ред. Р. М. Хаитова, Н. И. Ильиной. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. С. 374-378.