Хронический миелолейкоз. Исследование мутационного статуса BCR/ABL гена

Молекулярно-биологическое исследование, направленное на выявление точечных мутаций в гене BCR-ABL, которые могут обуславливать резистентность хронического миелолейкоза к некоторым ингибиторам тирозинкиназ.

Синонимы русские

Определение мутаций киназного домена BCR-ABL.

Синонимы английские

BCR/ABL1, Tyrosine Kinase Inhibitor Resistance, Kinase Domain Mutation Screen; Kinase domain mutation, ABL.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Специальной подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

Хронический миелолейкоз является опухолевым заболеванием кроветворной системы, в результате которого в периферической крови наблюдается повышение уровня определенного вида лейкоцитов. Развитие заболевания связано с возникновением в стволовой клетке крови генетической аномалии, которая получила название филадельфийской хромосомы. У человека на девятой хромосоме локализуется ген ABL, который кодирует образование белка, стимулирующего рост и деление клеток. При хроническом миелолейкозе часть гена ABL перемещается на хромосому 22, такая мутация называется транслокацией. Место разрыва 22-й хромосомы, куда чаще всего встраивается перемещенная часть гена ABL, называется M-bcr (от английского major breakpoint claster region). В норме в этом участке хромосомы расположен ген BCR, кодирующий белок, функция которого в настоящее время достоверно не изучена, однако есть сведения, что он участвует в процессах деления и дифференцировки клеток. В результате транслокации на 22-й хромосоме образуется сливной, или химерный, ген BCR-ABL, при считывании информации с которого продуцируется белок р210. От части гена ABL этот белок получает способности тирозинкиназы – внутриклеточного фермента, участвующего в передаче сигналов пролиферации, а часть, кодируемая геном BCR, способствует его активации. Таким образом, в результате описанной мутации на 22-й хромосоме формируется ген, белковый продукт которого – тирозинкиназа с повышенной активностью – стимулирует деление клеток с полной независимостью от внешних регуляторных механизмов. Лейкозные клетки становятся нечувствительными к сигналам самоуничтожения, приобретают способность выходить из костного мозга в периферическую кровь, не дожидаясь созревания.

В первое время лейкозные клетки полностью контролируются геном BCR-ABL, они сохраняют способность к дифференцировке и функционируют практически полноценно. Однако в процессе течения заболевания ген BCR-ABL индуцирует нестабильность генома, вследствие неконтролируемой пролиферации возникают точечные мутации, в том числе в самом гене BCR-ABL. Некоторые мутации могут приводить к перестройке той части молекулы BCR-ABL-тирозинкиназы, к которой присоединяются таргетные лекарственные препараты, подавляющие её активность. В результате этого препарат теряет способность связываться с мутантной тирозинкиназой и ингибировать её. По этой причине, несмотря на продолжающийся постоянный прием лекарства, отмечается прогрессирование заболевания. К настоящему времени обнаружено свыше 50 различных мутаций гена BCR-ABL, которые могут обуславливать резистентность опухолевого клона к одному или нескольким ингибиторам тирозинкиназ.

Для чего используется исследование?

• Для выявления точечных мутаций в химерном гене BCR-ABL, которые могут менять структуру кодируемого им белка и приводить к резистентности к отдельным препаратам группы ингибиторов тирозинкиназ.

Когда назначается исследование?

• У пациентов с хронической фазой хронического миелолейкоза:
  • неудача лечения в установленные контрольные временные точки: недостижение большого цитогенетического ответа к 3 месяцам терапии, недостижение большого молекулярного ответа к 12 месяцам терапии;
  • любые признаки утраты ответа (гематологический или цитогенетический рецидив);
  • повышение уровня BCR-ABL на 1 логарифм (в 10 раз) и утрата большого молекулярного ответа.
• При прогрессировании заболевания в фазу акселерации или бластного криза.

Что означают результаты?

Результат исследования представляет собой название обнаруженной мутации гена BCR-ABL и сведения о её влиянии на чувствительность к определенным ингибиторам тирозинкиназ.

Важные замечания

• Исследование позволяет обнаружить только известные на настоящий момент мутации. В связи с этим отрицательный результат не означает отсутствие редкой, неизученной мутации гена BCR-ABL и, соответственно, резистентности к терапии, особенно если на это указывают другие клинические и лабораторные данные.
• Мутация T315I обуславливает резистентность ко всем существующим ингибиторам тирозинкиназ, кроме понатиниба.
• Помимо точечных мутаций гена BCR-ABL, есть и другие механизмы формирования резистентности к ингибиторам тирозинкиназ: активация дополнительных сигнальных путей, которые в обход BCR-ABL-тирозинкиназы усиливают деление и подавляют гибель опухолевых клеток, избыточное связывание препаратов с транспортными белками крови (например, связывание иматиниба с α1–кислым гликопротеидом приводит к повышению концентрации лекарства в плазме и снижению его поступления в опухолевые клетки), повышенная экспрессия белка множественной лекарственной устойчивости PGP (он подобно насосу выкачивает из цитоплазмы клеток лекарственные препараты). Таким образом, при отрицательных результатах исследования на мутации в гене BCR-ABL лечащий врач может порекомендовать дополнительное обследование для исключения других причин неэффективности терапии.
• Значимость выявленной мутации для смены ингибитора тирозинкиназ определяется исключительно лечащим врачом.

Также рекомендуется

• Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с обязательной микроскопией мазка крови)

• Хронический миелолейкоз. ПЦР-анализ относительной экспрессии гена BCR/ABL – количественная RQ ПЦР

Кто назначает исследование?

Гематолог, онколог, терапевт, врач общей практики.

Литература

• Wintrobe’s clinical hematology / editors, John P. Greer, Daniel A. Arber, Bertil Glader, Alan F. List, Robert T. Means Jr., Frixos Paraskevas, George M. Rodgers. – 13th edition. Lippincott Williams & Wilkins, 2014. Pages 1711–1712.

1. NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology: Chronic Myeloid Leukemia. Version 4.2018 – January 24, 2018. Available at www.nccn.org.

2. Гематология: национальное руководство / под ред. О. А. Рукавицына. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2015. С. 381–398.